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\n Pesquisadores da Embrapa Meio Ambiente demonstraram como a aera\u00e7\u00e3o e a rela\u00e7\u00e3o entre carbono e nitrog\u00eanio influenciam a produ\u00e7\u00e3o de prop\u00e1gulos de Clonostachys rosea em cultivo submerso. O fungo apresentou potencial para compor biofungicidas contra a podrid\u00e3o-cinzenta, causada por Botrytis cinerea. Formula\u00e7\u00f5es com con\u00eddios, microscler\u00f3dios e metab\u00f3litos reduziram a incid\u00eancia da doen\u00e7a em tomate-cereja (DOI 10.1002\/mbo3.70162).
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\n O estudo avaliou duas condi\u00e7\u00f5es de aera\u00e7\u00e3o. Os cientistas controlaram a disponibilidade de oxig\u00eanio por meio da propor\u00e7\u00e3o entre o volume do meio l\u00edquido e o volume dos frascos. O tratamento com maior aera\u00e7\u00e3o usou cinquenta mililitros de meio em frascos de duzentos e cinquenta mililitros. O tratamento com menor aera\u00e7\u00e3o recebeu cem mililitros no mesmo tipo de recipiente.
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\n Carbono e nitrog\u00eanio
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\n Os pesquisadores tamb\u00e9m compararam rela\u00e7\u00f5es entre carbono e nitrog\u00eanio de cinquenta para um e dez para um. A combina\u00e7\u00e3o entre maior aera\u00e7\u00e3o e rela\u00e7\u00e3o de cinquenta para um favoreceu a produ\u00e7\u00e3o de con\u00eddios submersos. No quarto dia de fermenta\u00e7\u00e3o, a concentra\u00e7\u00e3o alcan\u00e7ou 1,31 bilh\u00e3o de con\u00eddios por mililitro. A concentra\u00e7\u00e3o de con\u00eddios permaneceu maior nos meios com propor\u00e7\u00e3o de cinquenta partes de carbono para uma parte de nitrog\u00eanio, independentemente do n\u00edvel de aera\u00e7\u00e3o.
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\n A forma\u00e7\u00e3o de microscler\u00f3dios seguiu outro padr\u00e3o. Essas estruturas apareceram apenas nos meios com rela\u00e7\u00e3o de dez partes de carbono para uma parte de nitrog\u00eanio. A maior aera\u00e7\u00e3o elevou a concentra\u00e7\u00e3o para 1,5 mil microscler\u00f3dios por mililitro no terceiro dia e 2,2 mil por mililitro no quarto dia. Os valores superaram em 29 e 27 vezes, respectivamente, os resultados obtidos sob menor aera\u00e7\u00e3o.
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\n Estruturas de resist\u00eancia
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\n Os microscler\u00f3dios funcionam como estruturas de resist\u00eancia. Eles favorecem a sobreviv\u00eancia do fungo sob condi\u00e7\u00f5es adversas. Ap\u00f3s reidrata\u00e7\u00e3o dos microgr\u00e2nulos secos, o material produzido sob maior aera\u00e7\u00e3o originou, em m\u00e9dia, 12,2 bilh\u00f5es de con\u00eddios a\u00e9reos por grama. O material obtido sob menor aera\u00e7\u00e3o produziu 1,73 bilh\u00e3o por grama.
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\n A equipe formulou os prop\u00e1gulos em microgr\u00e2nulos dispers\u00edveis em \u00e1gua. Os con\u00eddios usados na formula\u00e7\u00e3o vieram do cultivo com maior aera\u00e7\u00e3o e rela\u00e7\u00e3o entre carbono e nitrog\u00eanio de cinquenta para um. Os microscler\u00f3dios vieram do meio com maior aera\u00e7\u00e3o e rela\u00e7\u00e3o de dez para um. O trabalho tamb\u00e9m avaliou o filtrado do cultivo sem c\u00e9lulas, composto por metab\u00f3litos liberados durante a fermenta\u00e7\u00e3o.
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\n Os ensaios utilizaram frutos de tomate-cereja da variedade Sweet Grape. Os cientistas aplicaram os tratamentos de forma preventiva, antes da inocula\u00e7\u00e3o de Botrytis cinerea. No quinto dia, 79% das les\u00f5es do controle com o pat\u00f3geno apresentaram podrid\u00e3o cinzenta. Os tratamentos com con\u00eddios, microscler\u00f3dios e filtrado reduziram a incid\u00eancia para 40%, 24% e 24%, respectivamente.
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\n No s\u00e9timo dia, o controle sem Clonostachys rosea apresentou desenvolvimento da doen\u00e7a em 85% das les\u00f5es. Os tratamentos biol\u00f3gicos promoveram supress\u00e3o entre 53% e 72%. Con\u00eddios e microscler\u00f3dios colonizaram as les\u00f5es e limitaram o avan\u00e7o do pat\u00f3geno. O filtrado manteve as \u00e1reas tratadas sem crescimento vis\u00edvel do agente de biocontrole.
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\n An\u00e1lises qu\u00edmicas do filtrado identificaram sorbicilinoides entre os principais metab\u00f3litos produzidos durante a fermenta\u00e7\u00e3o. Essas subst\u00e2ncias apresentam atividade antif\u00fangica e podem contribuir para a prote\u00e7\u00e3o observada nos frutos. A combina\u00e7\u00e3o entre prop\u00e1gulos vivos e compostos produzidos pelo fungo abre espa\u00e7o para estrat\u00e9gias com mais de um mecanismo de a\u00e7\u00e3o.
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\n Clonostachys rosea
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\n Clonostachys rosea atua como micoparasita e pode atacar fungos fitopatog\u00eanicos. O microrganismo tamb\u00e9m produz enzimas e metab\u00f3litos, induz resist\u00eancia em plantas e apresenta atividade contra alguns insetos e nematoides. Apesar desse conjunto de mecanismos, poucos biopesticidas comerciais usam a esp\u00e9cie. O mercado brasileiro ainda n\u00e3o conta com produto baseado nesse agente, segundo os pesquisadores.
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\n A podrid\u00e3o cinzenta afeta mais de duzentas esp\u00e9cies vegetais. Entre os hospedeiros aparecem tomate, pepino, berinjela, uva e morango. A doen\u00e7a provoca perdas no campo e ap\u00f3s a colheita. A capacidade de Botrytis cinerea para desenvolver resist\u00eancia a diferentes grupos de fungicidas amplia a necessidade de programas integrados de manejo.
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\n O controle da aera\u00e7\u00e3o e da composi\u00e7\u00e3o nutricional permite direcionar a fermenta\u00e7\u00e3o para o prop\u00e1gulo de interesse. Essa defini\u00e7\u00e3o pode apoiar processos industriais com produ\u00e7\u00e3o padronizada, maior estabilidade e menor custo. O cultivo l\u00edquido tamb\u00e9m permite regular pH, oxigena\u00e7\u00e3o, temperatura, atividade de \u00e1gua e disponibilidade de nutrientes.
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\n A tecnologia ainda depende de valida\u00e7\u00e3o em condi\u00e7\u00f5es comerciais. As pr\u00f3ximas etapas incluem o escalonamento do processo fermentativo, ajustes na formula\u00e7\u00e3o, ensaios em estufas e lavouras, avalia\u00e7\u00f5es sob diferentes temperaturas e n\u00edveis de umidade, estudos de armazenamento, an\u00e1lises de seguran\u00e7a dos alimentos e compara\u00e7\u00f5es de custo e desempenho com solu\u00e7\u00f5es dispon\u00edveis.
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\n O trabalhou foi desenvolvido por Gabriel Moura Mascarin, M\u00e1rcia Regina Assalin, Nilce Naomi Kobori e Wagner Bettiol.
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